**猪流感通用荧光PCR检测试剂盒使用说明书**

产品名称：

通用名称：猪流感通用荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）

英文名称：Swine Influenza Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

包装规格：

50T/盒

预期用途：

本试剂盒采用实时荧光PCR技术，旨在定性检测猪流感病毒，具有对猪流感病毒引发的流感以及相关并发症诊断和疗效评估的重要指导价值。

原理：

本试剂盒设计了针对猪流感病毒高度保守区域的特异性引物和探针。在存在猪流感病毒基因组模板的反应体系中，PCR反应得以进行，同时释放荧光信号。通过荧光定量PCR仪实时监测和输出对应通道信号，以实现检测结果的定性分析。

试剂盒组成：

• SIV RT-PCR反应液：875 μL × 1管
• SIV混合酶液：125 μL × 1管
• SIV阳性对照：40 μL × 1管
• SIV阴性对照：40 μL × 1管
• 说明书：1份

注：阴性对照为灭菌纯水，阳性对照为含猪流感病毒靶基因的质粒。

储存条件及有效期：

本试剂盒需避光储存于-20℃以下，避免反复冻融，有效期为12个月。

适用仪器：

兼容各类多通道实时荧光定量PCR仪，包括ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列等。

样本要求：

1. 采集方式：

• 咽喉拭子：将拭子深入喉头及上颚裂处来回刮取3至5次，收集咽喉分泌液。
• 鼻拭子：将拭子深入鼻腔周围收集分泌液。
• 将咽喉拭子和鼻拭子放入含10 mL生理盐水的离心管中保存。
• 优选合成纤维拭子，不推荐使用棉拭子及木杆。

2. 血液或血清样品：提取无菌注射液中的样品置于离心管中待检。

3. 应使用含蛋白稳定剂的病毒运输液进行样本收集。

4. 避免样本间的交叉污染。

5. 收集后可立即检测，如无法立即检测，可在2～8℃冷藏保存；长期保存应置于-80℃以下，避免反复冻融。

检验方法：

1. **试剂准备**：

• 取出试剂盒中的所需试剂，随着融化均匀后瞬时离心去除管壁附着液体。
• 计算实验所需的反应次数（n），按照反应体系表计算各试剂量。

2. **样本准备**：

使用QIAGEN或Roche公司的RNA提取试剂盒提取RNA，操作依照说明书进行。

3. **加样**：将处理后的样本RNA各5μl加入PCR反应管中，终体积为25μl/管，并转移至PCR仪器上。阳性及阴性对照样本亦各自加入相应的对照品。

4. **PCR扩增**：在实时荧光定量PCR仪中设置扩增参数，进行PCR反应。

参考值（参考范围）：

1. **试剂盒有效性判定**：

• 阳性对照：典型S型扩增曲线或Ct值≤35。
• 阴性对照：Ct值＞38或无Ct值。

2. **标本结果判定**：

• 阳性：Ct值≤35。
• 可疑：Ct值在35～38之间，需重复检测。
• 阴性：Ct值＞38或无Ct值。

试剂盒的局限性：

1. 低于最低检出限的核酸可能导致假阴性。

2. 操作不当可能导致RNA降解，从而产生假阴性结果。

3. 交叉污染可能导致假阳性。

产品性能指标：

最低检出限为103 Copies/mL，CV值≤3%。

注意事项：

• 实验室应遵循国家基因扩增检验实验室管理规范。
• 样本处理应在0-4℃下进行，避免RNA降解。
• 各区域物品应专用，以免交叉污染，并定期消毒工作台及实验用品。
• 注意避免气泡产生和反应管盖紧，以确保结果准确。
• 所有试剂使用前需在常温下复溶均匀。

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